如今社會的發展速度最快,
蛋白質含量常規檢測是大家最為關注的問題。
在眾多的蛋白質含量常規檢測方法當中,
蛋白質的理化性質及反應眾多,
光是顯色反應就達十餘種,
每一種或一類性質就意味著一條檢測途徑,
因此能夠用於檢測蛋白質的方法多種多樣。
那麼,
蛋白質的檢測方法有哪些?
(一)蛋白質的鹽析 取1.5mL 蛋白質溶液,
加入等體積飽和硫酸銨溶液(濃度為50%飽和),
微微搖動試管,
使溶液混合均勻後,
靜置數分鐘,
球蛋白即析出呈絮狀沉澱(如無沉澱可再加少許飽和硫酸 銨),
用濾紙濾取上清液,
濾液中再加入固體硫酸銨粉末至不再溶解,
析出的即為清蛋白,
再 加水稀釋,
觀察沉澱是否溶解。
(二)蛋白質的沉澱 1.用重金屬鹽沉澱蛋白質 取三支試管,
各加1mL 蛋白質溶液,
分別各加3 滴6%醋酸鉛溶液、3 滴2%硫酸銅溶 液和3 滴1%硝酸銀溶液,
觀察蛋白質沉澱的析出。
2.用有機酸沉澱蛋白質 取二支試管,
各加1mL 蛋白質溶液,
並加5%醋酸溶液使之呈酸性(該沉澱反應最好在 弱酸中進行)。
然後分別滴加飽和苦味酸、飽鞣酸溶液,
直至沉澱產生為止。
用10%三氯醋酸溶液、3%磺柳酸溶液進行類似實驗(用量同前),
觀察現象。
(三)蛋白質的顏色反應 1.黃蛋白反應 於試管中,
加1mL 蛋白質溶液和10 滴濃硝酸溶液,
直火加熱煮沸,
觀察溶液和沉澱顏色。
冷卻後,
再加入20 滴10%氫氯化鈉溶液,
觀察顏色變化。
2.與茚三酮的反應 在二支試管中,
分別加1%賴氨酸溶液和1mL 蛋白質溶液,
分別加2 滴茚三酮溶液,
加 熱至沸,
觀察有什麼現象? 3.與硝酸汞試劑作用——米倫反應 在二支試管中,
分別加 1mL 0.5%苯酚溶液和1mL 蛋白質溶液,
再各加 0.5mL 米倫試劑 (不可太多),
苯酚溶液出現玫瑰紅色,
而蛋白質溶液加熱後出現沉澱,
加熱凝固的蛋白質呈 磚紅色,
有時溶液也呈紅色。
4.蛋白質的雙縮脲反應
(1) 雙縮脲的生成 於乾燥試管中,
加0.2g~0.3g 尿素,
微火加熱,
尿素熔化並形成雙縮脲,
放出的氨可用 紅色石蕊試紙試驗。
試管內有白色固體出現後,
停止加熱。
(2) 雙縮脲反應 上述產物冷卻後,
加1mL10%氫氧化鈉溶液,
搖勻,
再加2 滴2%硫酸酮溶液,
混勻,
觀察 有無紫色出現。
於試管中,
加1mL 清蛋白溶液和1mL10%氫氧化銅溶液,
再加1 滴~2 滴2%硫酸銅溶液共 熱,
由於蛋白質與硫酸銅生成絡合物而呈紫色。
取1%賴氨酸溶液作對照,
觀察顏色變化。
(四) 核蛋白組成的鑒定 1.核蛋白的水解 取20mL 酵母核蛋白混懸液于離心管中離心分離,
棄去清液,
將沉澱轉入小燒杯中,
加 15mL 5%硫酸,
蓋上表面皿在水浴上煮沸約1h(煮沸過程中保持原有體積),
水解畢,
離心分 離,
取上層清液作以下檢查。
2.核糖的鑒定 於試管中,
加 1mL 20%間苯二酚鹽酸溶液,
以小火加熱至沸,
迅速加入 5 滴水解液,
呈現紅色,
(如紅色不顯可再稍加熱)。
3.磷酸的鑒定 取10 滴水解液,
置於試管中,
加5 滴7%鉬酸銨溶液和2 滴濃硝酸溶液,
小心於火上 加熱,
即有黃色沉澱生成。
4.嘌呤與嘧啶的鑒定 取約4mL 水解液,
置於小燒杯中,
加入氨水至微鹼性,
過濾,
在濾液中加1mL 5%硝酸 銀銨溶液,
靜置片刻,
即有絮狀的嘌呤或嘧啶銀鹽沉澱生成。
注意事項 米倫試劑是硝酸、亞硝酸、硝酸汞及亞硝酸汞之混合物,
能與苯酚及某些酚類起顏色反應。
通過以上對蛋白質的檢測方法有哪些的簡單介紹,
大家應該對這些有所知道了吧。
這裡要提醒的是:當大家在生活中不幸被蛋白質的檢測方法疾病所困擾之後,
必須要注意把握好治療蛋白質的檢測方法疾病的方向,
從原理的方面出發,
這樣才能讓大家從根本上知道蛋白質的檢測方法。