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蛋白質的檢測方法有哪些

如今社會的發展速度最快, 蛋白質含量常規檢測是大家最為關注的問題。 在眾多的蛋白質含量常規檢測方法當中, 蛋白質的理化性質及反應眾多, 光是顯色反應就達十餘種, 每一種或一類性質就意味著一條檢測途徑, 因此能夠用於檢測蛋白質的方法多種多樣。 那麼, 蛋白質的檢測方法有哪些?

(一)蛋白質的鹽析 取1.5mL 蛋白質溶液, 加入等體積飽和硫酸銨溶液(濃度為50%飽和), 微微搖動試管, 使溶液混合均勻後, 靜置數分鐘, 球蛋白即析出呈絮狀沉澱(如無沉澱可再加少許飽和硫酸 銨), 用濾紙濾取上清液, 濾液中再加入固體硫酸銨粉末至不再溶解, 析出的即為清蛋白, 再 加水稀釋, 觀察沉澱是否溶解。

(二)蛋白質的沉澱 1.用重金屬鹽沉澱蛋白質 取三支試管, 各加1mL 蛋白質溶液, 分別各加3 滴6%醋酸鉛溶液、3 滴2%硫酸銅溶 液和3 滴1%硝酸銀溶液, 觀察蛋白質沉澱的析出。

2.用有機酸沉澱蛋白質 取二支試管, 各加1mL 蛋白質溶液, 並加5%醋酸溶液使之呈酸性(該沉澱反應最好在 弱酸中進行)。 然後分別滴加飽和苦味酸、飽鞣酸溶液, 直至沉澱產生為止。 用10%三氯醋酸溶液、3%磺柳酸溶液進行類似實驗(用量同前), 觀察現象。 (三)蛋白質的顏色反應 1.黃蛋白反應 於試管中, 加1mL 蛋白質溶液和10 滴濃硝酸溶液, 直火加熱煮沸, 觀察溶液和沉澱顏色。 冷卻後, 再加入20 滴10%氫氯化鈉溶液, 觀察顏色變化。 2.與茚三酮的反應 在二支試管中, 分別加1%賴氨酸溶液和1mL 蛋白質溶液, 分別加2 滴茚三酮溶液, 加 熱至沸, 觀察有什麼現象? 3.與硝酸汞試劑作用——米倫反應 在二支試管中, 分別加 1mL 0.5%苯酚溶液和1mL 蛋白質溶液, 再各加 0.5mL 米倫試劑 (不可太多),
苯酚溶液出現玫瑰紅色, 而蛋白質溶液加熱後出現沉澱, 加熱凝固的蛋白質呈 磚紅色, 有時溶液也呈紅色。 4.蛋白質的雙縮脲反應

(1) 雙縮脲的生成 於乾燥試管中, 加0.2g~0.3g 尿素, 微火加熱, 尿素熔化並形成雙縮脲, 放出的氨可用 紅色石蕊試紙試驗。 試管內有白色固體出現後, 停止加熱。 (2) 雙縮脲反應 上述產物冷卻後, 加1mL10%氫氧化鈉溶液, 搖勻, 再加2 滴2%硫酸酮溶液, 混勻, 觀察 有無紫色出現。 於試管中, 加1mL 清蛋白溶液和1mL10%氫氧化銅溶液, 再加1 滴~2 滴2%硫酸銅溶液共 熱, 由於蛋白質與硫酸銅生成絡合物而呈紫色。 取1%賴氨酸溶液作對照, 觀察顏色變化。

(四) 核蛋白組成的鑒定 1.核蛋白的水解 取20mL 酵母核蛋白混懸液于離心管中離心分離, 棄去清液, 將沉澱轉入小燒杯中,

加 15mL 5%硫酸, 蓋上表面皿在水浴上煮沸約1h(煮沸過程中保持原有體積), 水解畢, 離心分 離, 取上層清液作以下檢查。 2.核糖的鑒定 於試管中, 加 1mL 20%間苯二酚鹽酸溶液, 以小火加熱至沸, 迅速加入 5 滴水解液, 呈現紅色, (如紅色不顯可再稍加熱)。 3.磷酸的鑒定 取10 滴水解液, 置於試管中, 加5 滴7%鉬酸銨溶液和2 滴濃硝酸溶液, 小心於火上 加熱, 即有黃色沉澱生成。 4.嘌呤與嘧啶的鑒定 取約4mL 水解液, 置於小燒杯中, 加入氨水至微鹼性, 過濾, 在濾液中加1mL 5%硝酸 銀銨溶液, 靜置片刻, 即有絮狀的嘌呤或嘧啶銀鹽沉澱生成。 注意事項 米倫試劑是硝酸、亞硝酸、硝酸汞及亞硝酸汞之混合物, 能與苯酚及某些酚類起顏色反應。

通過以上對蛋白質的檢測方法有哪些的簡單介紹,

大家應該對這些有所知道了吧。 這裡要提醒的是:當大家在生活中不幸被蛋白質的檢測方法疾病所困擾之後, 必須要注意把握好治療蛋白質的檢測方法疾病的方向, 從原理的方面出發, 這樣才能讓大家從根本上知道蛋白質的檢測方法。