磷酸化抗體檢測要注意什麼

磷酸化抗體， 其實就是做磷酸化蛋白質的檢測， 但是對於它的一個檢測問題， 其實很多人都不太認識和瞭解， 那麼下面就為大家具體介紹一下， 磷酸化抗體一些檢測問題， 只有我們對這些常識有一些科學的認識， 那麼在生活當中出現這種情況的時候， 才不會手足無措。

做磷酸化蛋白質的檢測， 在裂解液中一定要加入磷酸酶抑制劑， 防止其將磷酸化的蛋白質去磷酸化。 關於磷酸化蛋白質的檢測我想說明一下幾點：

1、組織的製備一定要在冰上操作， 而且速度要快。 如果不是立刻配置樣品最好先放在液氮裡冷凍起來， 哪怕兩個小時之後再製備樣品也有必要如此， 因為磷酸化的蛋白質很容易分解。

2、組織裂解液一定要加入磷酸酶抑制劑。 最好能夠多加一些蛋白酶的抑制劑。 防止各種酶水解蛋白質。 否則， 不僅磷酸化的測不出， 總蛋白質也很難測出來。

3、測磷酸化蛋白質， 上樣量可以大一些， 以載入量比較大的目標分子。

4、一抗和二抗的孵育時間都可相應延長， 我曾經做過一抗孵育5小時（常溫）， 二抗2小時的試驗， 結果很漂亮。

5、 推薦大家用發光劑顯影法， 這樣靈明度要高一些。

6、壓片時間可以相應的延長。

以上就是關於磷酸化抗體的介紹， 希望通過這些介紹， 大家對這種常識， 有科學的認識， 在生活當中， 其實我們更多的瞭解這些常識， 也是為了幫助我們保證健康， 避免一些不利影響的發生， 每個人都應該注重這些認識。